|
Этапы ИОМ
За 24 часа перед осеменением матки получают наркоз углекислым газом, эта процедура увеличивает вероятность начала яйцекладки после операции.
Маток помещают в клеточки и поддают наркозу длительностью около 5 минут.
Перед забором спермы трутней шприц наполняют разбавителем для семени.
Разбавителем может быть раствор поваренной соли или физиологический раствор. Через дополнительный фильтр физиологический раствор дополнительно стирилизуется через мембранный фильтр.
Производится наполнение шприца для забора семени физиологическим раствором. Из шприца следует выпустить все пузырьки воздуха. После установки иглы на шприц ее наполняют физиологическим раствором, после чего в кончике иглы следует оставить пузырек воздуха. После этих действий шприц устанавливают на аппарате для ИОМ или отбора спермы.
Зрелое семя бежевого цвета с консистенцией свежей сметаны. Стеклянной иглой следует только слегка касаться поверхности семени. При наполнении семени нужно следить чтобы в нее не попадали твердые тела, которые приведут к засорению иглы. Как и в природе шприц набирается семенем от нескольких трутней. Для ИОМ набирается 8мкл семени, что соответствует от 8 до 10 зрелых трутней. В случае необходимости кончик иглы следует очистить о валик ваты.
После того, как был взято достаточно семени кончик иглы наполняют капелькой физиологического раствора.
В методе гомогенезирования или смешивания спермы многих, а даже нескольких сотен трутней производится для большей генетической однородности.
Взятое в иголку семя многих трутней смешивается в соотношении 12к 1 со стерильным физиологическим раствором. Во время работ связанных с гомогенизацией необходима чистота. Загрязнение всего одной порции может привести к неудачной операции даже к смерти всей серии искусственно осемененных маток. Эта техника в связи с высокой стоимостью используется только в некоторых программах разведения.
С помощью пипетки семя основательно перемешивают с физиологическим раствором, после чего эту смесь переносят в трубку центрифуги. Для вращения подходят только центрифуги оснащенные вибрирующим ротором. Через 10-15 минут, при скорости 1000 оборотов смешанное семя осело на дне трубки. Избыток физиологического раствора удаляют, а пластиковая трубка отсекается на уровне семени. Таким однородным семенем наполняют иглы для искусственного осеменения.
Матку, которую за день до операции подвергли наркозу двуокисью углерода кладут в трубку, которая держит ее во время операции. Эту трубку устанавливают на блоке для искусственного осеменения. К трубке с маткой подводят двуокись углерода. Наркоз обездвиживает матку во время операции. Для контроля количества газа его пропускают через бутылку с водой. Брюшной стороной, на снимке с левой стороны открывается кончик брюшка. Скоба для жала с отверстием нужна для того чтобы захватить основание жала. При отклонении его в сторону открывается вход во влагалище. Вход во влагалище виден как уплотнение в центре изображения. Из направленной в сторону входа во влагалище иглы шприца удаляется капля физиологического раствора. Вход во влагалище виден только при использовании метода, когда жало отодвигают в сторону. Таким образом установленную иглу легко ввести во влагалище матки. После чего происходит впрыск семени. После впрыска иглу выводят из влагалища, а снятием двух скоб завершают операцию по ИОМ. Еще находящуюся под наркозом матку вынимают из удерживающей ее трубки и помещают в клеточку. Обрезание одного крылышка предотвращают вылеты матки. Дополнительно перед летком помещают летковый заградитель. Перед возвращением матки в свою семью пробку клетки меняют на медово-сахарное тесто. Процесс расплода матки в улье зависит от температуры и, прежде всего от заботы пчел.
Молодых маток ИОМ до зимы подсаживают в большие семьи.
От момент откладки яйца до половозрелости трутня проходи около 40 дней.
Для ИОМ нужны следующие материалы:
Ватные палочки, физиологический раствор, 76% этиловый спирт, дистиллированная вода, все это должно быть под рукой.
Для анестезии применяют пищевой СО2 применяемый для производства напитков и кремов. Подачу проверяем помещая трубку в колбу с водой, проверка должна показать два пузырька в секунду. После этого газовый шланг закрепляем на нижнем конце маткодержателя.
Затем переходим к дезинфекции деталей которые будут контактировать с маткой. Металлические части, в том числе крючки, дезинфицируем спиртом. Капилляр обрабатываем дистиллированной водой.
Приступаем к набору спермы. Сначала в шприц вводим два куб см физиологического раствора, затем надеваем продезинфицированный капилляр и из капилляра выпускаем воздух. Для очистки используем ватные палочки и дистиллированную воду. На капилляр одеваем чехол, чтобы защитить его от поломки и загрязнения.
Трутни перед взятием спермы обезглавливаются, что неизбежно приводит к их смерти. Чтобы вызвать выворачивание эндофалуса и эякуляцию спермы его берут за грудь с вентральной стороны пальцами левой руки, затем спинную часть брюшка слегка сдавливают пальцами правой руки. Это вызывает сокращение брюшных мышц и частичное или полное выворачивание полового органа и эякуляцию. Здесь эякулят белого цвета, что указывает на незрелость трутня. В данном случае невозможно получить сперму для осеменения, даже если все произведено правильно.
Следует избегать засасывание мукуса, он белого цвета, он быстро сворачивается и образует пробку. Когда подносим следующего трутня, то предварительно выпускаем капельку спермы предыдущего трутня, чтобы она соединилась с новой порцией. А затем все втягиваем в шприц. Для заполнения наконечника забираем сперму от 7-8 трутней. Чтобы сперма не высыхала столбик ее поднимаем и запираем каплей физиологического раствора. Содержимое шприца должно соответствовать следующей схеме: физраствор, пузырек воздуха, сперма, пузырек воздуха, физраствор.
С начала используется вертральный крючек, он должен удерживать стернит матки. Дорсальный крючок имеет отверстие, в которое вводится жало. При помощи регулировочных винтов оператор производит раскрытие камеры жала матки, это довольно деликатная операция.
Итак, все готово чтобы приступить к непосредственно к осеменению. Из капилляра удаляем каплю физраствора и воздух. Приближаем капилляр к матке. Кончик капилляра должен находиться точно над влагалищем в камере жала. Наконечник шприца вводим во влагалище легким движением вперед-назад, чтобы отвести клапан препятствующий прохождению в непарный яйцевод. Капилляр погружаем на полтора миллиметра и осторожно впрыскиваем сперму, примерно восемь мм.куб. После завершения операции шприц поднимаем и дезинфицируем после каждого осеменения.
Убираем торсальный крючок освобождая жало, затем вертральный. Рекомендуется оставить матку под наркозом на пять минут после операции. Матку вынимаем из маткодержателя и пока она в неподвижном состоянии, метим ее.
Подрезаем крыло, чтобы предотвратить вылет матки.
Перед пробуждением молодую матку помещаем в клеточку и в конечном счете возвращаем в нуклеус из которого она была извлечена.
Для того, чтобы искусственное осеменение имело смысл нужно чтобы ему предшествовала серьезная работа по селекции маток и трутней.
Это, как правило, три не родственных между собой линии, особенно если речь идет о получении гибридов.
Подсадки маток в семьи
_________________
"Самым практичным в деле является наличность правильной теории" Гете
|
